经内镜直接检测幽门螺杆菌的基础与临床研究

自1983年Warren和Marshall报告,从胃炎患者胃粘膜分离幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)以来,越来越多的资料表明,Hp与慢性胃炎,消化性溃疡关系密切,历此,为了有效的防治Hp相关慢性胃炎、消化性溃疡等疾病,需要一种快速、准确而直观的检测Hp手段。目前,检测Hp手段较多,包括:切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、13C呼气试验法及抗体检法等。这些方法归纳起来,有以下缺点:①需取材标—费事;②标本需要处理—费时间;③作者的新鲜胃切除标本实验表明,Hp在胃内的分布并非均匀,如局部取样检测,不可避免的出现假阴性。那么,能否将胃内的Hp检测直观化呢?就此问题,我们进行基础及临床的探讨。

1 基础研究

1.1 原 理

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰阴性螺旋状短杆菌,具有强的尿素酶科活性,将尿素分解成氨和二氧化碳,氨属碱性,提高胃内pH值,使含有酚红的试剂由桔黄色变成粉红色或红色。

1.2 试剂的研制

确定一定浓度的Hp分解尿素,改变pH值,使试剂颜色改变的尿素和酚红的浓度。方法是将一定浓度的幽门螺杆菌,即5×10CFU/ML分别加入不同浓度尿素和酚红溶液中,观察其颜色变化(表1)。

实验结果表明,一定浓度的Hp分解尿素,改变pH值,使试剂颜色改变的尿素和酚红的最适宜浓度分别为0.5mol/L及0.025%

表1 不同浓度素与酚红溶液中Hp的颜色

尿素浓度(mol/L) 酚浓度(%) 颜色变化
0.1 0.005
0.2 0.010
0.3 0.015
0.4 0.020
0.45 0.025

1.3 Hp分解尿素的适宜pH

我们配成上述试剂后喷洒于胃粘膜,发现除极个别病例胃粘膜着粉红色或红色,绝大多数病例并不着色,这是什么原因呢?后来发现Hp菌体所含的尿素酶,分解尿素的最适宜pH值为5~8,而慢性胃炎,尤其是消化性溃疡病人的pH值多在1~3,我们认为使Hp分解尿素,必须改胃内的pH值,根据胃酸泵抑制剂奥美拉唑和胃H2受体阻滞剂Famotidine20mg或检查前1h静脉注射Famotidine 20mg,检测慢性胃炎,消化性溃疡共30例,用pH检测慢性胃炎,消化性溃疡共30例,用pH检测导管从胃镜活检孔插入检测胃pH值,结果pH值为5.0~5.5,2例;5.6~6.0,15例;6.1~6.5,8例;6.6~7.0,5例。

以上结果表明,检查前1a晚上服奥美拉唑20mg,或检查前1h静脉注射famotidine20mg,胃pH值达到5.0~7.0。

2 临床研究

2.1 对象与方法

本组175例均经GIF—100型电子胃镜诊断,其中慢性胃炎100例,胃溃疡25例,十二指肠溃疡50例。检查前1d晚上口服奥美拉唑20mg。插入胃镜后先将胃液抽空,胃窦、胃角及胃体各取1块活检做切片,吉姆萨染色、检测Hp,以作与喷洒法相对照。然后经塑料管注入我消化实验室研制的试剂喷洒于胃窦、胃角、胃体及溃疡周围,观察颜色变化,胃粘膜被染成粉红色或红色为阳性。

3 结果见表2,表3。

表2 试剂喷洒与切片法相对照结果

方  法 慢性胃炎(n:100) 胃溃疡(n:25) 十二指肠溃疡(n:50)
切片法Hp阳性率(%) 50.0 72.0 80.0
试剂喷洒Hp阳性率(%) 68.0 80.0 90.0

表3 慢性胃炎、胃溃疡、十二指溃疡的染类型(%)

试剂反应 n 弥慢性着色 局灶性着色 散在性着色 不着色
慢性胃炎 100 57(57.0) 2(2.0) 9(9.0) 32(32.0)
胃溃疡 25 13(52.0) 5(20.0) 2(8.0) 5(20.0)
十二指溃疡 50 34(68.0) 4(8.0) 7(14.0) 5(100.0)

4 讨论

目前,检测Hp的方法较多,包括切片法、涂片法、刷检法、培养法、尿素酶法、13C呼气试验法及抗体检测法等。这些检查均需一定的时间,1988年作者研制的快速Hp检测试剂,只需几秒至1min以内即可检测Hp,但其缺点是取胃粘膜活检的局限性可能出现假阴性。本方法是Hp菌体内含有丰富的尿素酶—分解尿素—改变pH(偏碱性)—试剂由桔黄色变为粉红色或红色的原理设计。伊藤报告Hp尿素酶活性的适宜pH值为5.0左右。我们从临床试验验证,病人在受检前一天晚上,服胃酸泵抑制剂奥美拉唑20mg或胃组织胺H2受体阻滞剂famotidine 20mg静脉注射60min后,胃pH值达到5~7。

作者采用新鲜胃切除标本反复检测Hp结果表明,Hp在胃粘膜的分布并非均一,提示胃粘活检检法检测Hp可能出现假阴性,本方法可除假阴性。

本文慢性胃炎100例的着色率为68%,切片法Hp阳性率为60%,胃溃疡25例的着色率为80%,切片法Hp阳性率为72%,十二指肠溃疡50例的着色率为90%,切片法Hp阳性率为80%,提示切片法确有假阴性。

内镜下胃粘膜萎缩轻中度的17例中5例呈弥漫性着色,2例呈散在性着色,而胃粘膜萎缩明显的4例均不着色。另外,本文还提示,胃内Hp的分布以幽门腺领域为多,越向胃底腺区,Hp的分布也越稀疏。胃溃疡25例中13例呈弥漫性着色,5例呈局灶性着色,2例呈散在性着色,且在这些着色的部位中均检出Hp,令人感兴趣的是7例胃溃疡周围粘膜呈深着色,其中包括难治性胃溃疡3例。十二指肠溃疡50例中34例(68.0%)呈弥漫性着色,4例(8.0%)呈局灶性着色,7例(14.0%)呈散在性着色,在这些着色组织中均检出Hp。

本文资料还表明,Hp阳性的胃及十二指肠溃疡较阴性者治愈时间延长,且复发率也高。上述结果表明,在治疗慢性胃炎和消化性溃疡的过程中必须清除Hp,本文则提供了在内镜下直接清除Hp的广阔前景。内镜下喷洒药物直接清除Hp的临床实验正在进行。