第二节 甘油三酯测定(当前章节内容组合)

一、乙酰丙酮法

1.原理

血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯,经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸,甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3,5二乙酰,1,4二氢甲基吡啶,其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比,420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。

2.试剂组

代号 种类 浓度 组成 贮2-8℃ 有效时间
R1 抽提液 (CH3)CHOH(A.R)重蒸馏
R2 吸附剂 氧化铝,水洗除去微细颗粒, 110℃烤干3h以上 闭封 一周
R3 皂化剂 5% KOH 5g+H2O→100ml
R4 醋酸溶液 2mol/L CH3COOH 11.5ml+H2O→100ml
R5 过碘酸钠 0.05mol/L NaIO41.07g+H2O→100ml
R6 氧化剂 R4 1体积+R51体积 一周
R7 醋酸铵液 CH3COONH215.4g+H2O→100ml
R8 显色剂 CH3COCH2COCH30.75ml+R-1
40ml+R-7 100ml+R-4 80ml
R9 参考液 2mg/dl 三油酸甘油酯2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl)

3.操作

按图15-3操作。

血清甘油三酯(乙酯丙酮法)测定操作图

图15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)测定操作图

4.计算

血清TG浓度=ESA/EST×1.13(mmol/L)

二、酶法(GK-GPO-POD比色法)

血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸,甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下,生成3-磷酸甘油,尔后,在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2,H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下,生成红色亚醌化合物(quinoneimine),比色(500nm),其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

(一)手工测定法

1.试剂组成

代号 种类 浓度 贮存2~8℃
R1 磷酸甘油氧化酶 ≥3.0KU/L 冷藏
(A液) 抗坏血酸氧化酶 ≥1.0KU/L
甘油激酶 ≥0.7KU/L
4-氨基安替比林 80mg/L
R2 脂蛋白脂酶 ≥2.0KU/L 冷藏
过氧化物酶 ≥10KU/L
ESPAS 300mg/L
R3(参考液) 甘油酸三脂 200mg/dl(2.26mmol/L) 冷藏

*:一般采用商品试剂盒

血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

2.操作

按图15-4操作。

3.计算

血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)

(二)生化分析仪检测

全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。

1.试剂

A液:GK,GPO,4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

B液:POD,Lipase,ESPAS等。

标准液:甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

2.上机参数

名称 参数
方法 终点法
波长 双波长(540nm 700nm)
试剂A反应时间 2~3min
试剂B反应时间 5~6min
反应温度 37℃
样本用量 4μl
试剂A用量 200μl
试剂B用量 100μl
单位 mmol/L

3.操作过程

生化分析仪检测操作过程

4.计算

以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算,自动打印结果。

5.注意事项

①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

②试剂在有效期内2~8℃避光保存。

③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。