第三节 抗体法检测LDL-R

Felgines等在研究RICO鼠的肝载脂蛋白时报道了抗体法的应用。

用来源于牛肾皮质的LDL-R免疫兔,得到兔抗牛-LDL-R抗体,离心法收集纯化细胞膜蛋白,点样于硝化纤维膜上,于猝灭液中温育1h,以TTBS洗3次,加入稀释的抗LDL-R抗体血清,再温育90min,TTBS洗后,纤维膜用结合有辣根过氧化物酶的第二抗体羊抗兔-IgG温育1h30min,TTBS洗3次,TBS洗1次,15min后用4-氯-1-奈酚和H2O2显色。

TTBS:Tris-HCL20mM,pH7.5NaCl500mM,Tween200.05%;TBS:Tris-HCL20mM。pH7.5,NaCl 500mM