北美黄连有效成分的提取分离与含量测定

时间
2004-05-14

北美黄连莲Hydrastis canadensis又称白毛莨,为多年生草本植物,原产于加拿大和美国东部地区。其干燥根与根茎入药.根茎亮黄色,多节;茎黄色,有绒毛及平行而不规则的结节。该植物药先后两次被美国药典收录(1830年,1860~1926年),后来又被法国等13个国家药典相继收入。

1、化学成分及应用概况

北美黄连的药用价值主要由于高含量的异喹啉类生物碱,包括北美黄连碱(hydras tine)、小檗碱(berberine)、北美黄连次碱(hydrastinine)、坎那定(canadine)、canadaline等。此外还含有罂粟素、绿原酸、植物甾醇、树脂、挥发油等成分。

北美黄连有抗菌消炎、收敛止血、愈伤、利胆的作用,在北美广泛用于消除呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜炎症。已开发出各种制剂,内服可用于胃肠炎、胃酸过少、胃溃疡、消化不良、上呼吸道感染、月经过多和子宫颈出血;外用治疗牛皮癣、痔疮、鹅目疮或创伤,洗液可用于阴道炎、白带过多,含漱剂用于牙龈炎、口腔溃疡,洗服液用于结膜炎等。

2、主要有效成分的分离精制

笔者根据文献报道,用适当溶剂提取了北美黄连中的有效成分北美黄连碱和盐酸小檗碱,并用住层析加以分离。

北美黄连干燥根茎粉碎,用乙醇加热提取,提取物用氯仿回流,过滤。滤液回收氯仿,真空干燥.少量氛仿溶解,上硅胶拄,氯仿-甲醇梯度洗脱.TLC定性.合并与对照品北美黄连碱相同部位,回收溶剂,析出晶体。乙酸乙酯-乙烷重结晶,得无色片状晶体I(mp130℃~132℃。滤渣干燥.95%乙醇-水(1:1)溶解.盐酸调pH=2,放置析出黄色针状结晶,乙醇-水重结晶,得晶体Ⅱ。

北美黄连干燥根茎粉碎,乙酸乙酯-乙烷混合溶剂回流提取,过滤.有机层水洗至中性,回收溶剂,固体物用无水乙醇、乙酸乙酯-乙烷多次重结晶,得晶体Ⅲ(mp130℃~132℃)。滤渣用95%乙醇回流提取,过滤,回收乙醇,加适量水,浓盐酸调pH=2,放置析出黄色针晶,乙醇-水重结晶,得晶Ⅳ。

将晶Ⅰ、晶Ⅲ与北美黄连碱对照品点于GF254硅胶板上,氯仿-甲醇(97:3)展开。在紫外254nm。下出现同样的紫色斑点(Rf 值为0.50),混合点样也只有一个斑点。

用HPLC法精制,选用Hylperil ODS,柱;流动相为3:7的乙腈与15%乙腈-85%0.01mol/mlSDS,流速0.8mL/min,检测波长300nm。晶Ⅰ、晶Ⅲ分别加人定量的北美黄连碱对照品;晶Ⅱ、晶Ⅳ分别加入定量的盐酸小檗碱对照品混合进样,均只有一个峰,回收率均在99.0%~101.0%范围内。结合上述实验认为晶Ⅰ、晶Ⅱ是北美黄连碱;晶Ⅱ、晶Ⅳ是盐酸小檗减。含量分析实验得北美黄连碱含量为99.60%,盐酸小檗碱含量为99。1%。

文献报道,采用乙醚-乙醇两步提取法可直接从北美黄连中获得北美黄连域及盐酸小檗碱,但乙醚作提取溶媒难以实现工业化生产。笔者选用乙酸乙酯作为主溶剂直接提取北美黄连碱,含量约为80%,多次重结晶后含量达98%。与文献法比较,本实验方法有操作简单(直接提取2~3h,文献法需26h),收率相近(直接提取1.6%,文献为1.9%),纯度高等特点。

3主要有效成分的含量测定

HPLC色谱条件与精制相同。北美黄连药材粉末250mg置于索氏提取器中,用甲醇提取2h,甲醇定容至50mL容量瓶内,微孔德膜过滤即为供试液。0.2mg/mL的北美黄连碱对照品溶液与0.5mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液及供试液各10μL分别进样,面积外标法计算含量。

北美黄连碱与盐酸小檗碱对照品溶液按不同量进样,回归方程分别为:Y=5.84×105+3440,r=0.9816(北美黄连碱);Y=4.15×106+3210,r=0.9913(盐酸小檗碱)。

在回收率实验中,样品中分别加人2000、4000和6000μg的北美黄连碱对照品,测出里分别为1960、3720和5860μg,平均回收率为96.22%,RSD为2.91%;样品中分别加入2300、4600和6900μg的盐酸小檗碱对照品,测出量分别为2220、4510和6630μg,平均回收率为96.88%,RSD为1.06%。

综上所述,由于北美黄连在国外广泛应用,因而在我国也具有广阔的生产与应用前景。通过对其有效成分的分离与测定,希望对其深入研究起到一定的参考作用。