葛根及其制剂中异黄酮类成分测定方法的研究进展

时间
2004-05-21

葛根为豆科植物野葛(pueraria、Lobatawilldohwi)或甘葛藤(puerariathomsoniiBenth)的干燥根。近年来,经过葛根化学成分、临床药理的科学研究表明:葛根的主要有效成分为异黄酮化合物[1,2],其中葛根素的含量最高,因此测定葛根中异黄酮类成分(主要是葛根素)的含量,成为评价葛根药材及其制剂质量的重要指标,本文概述了近10年来的研究进展。

1 分光亮度法

1.1 紫外分光亮度法

主要利用葛根素分子结构中羟基和芳环形成较强的共轭体系,对紫外光(250±1nm)有较强的特征吸收,且性质稳定。

刘直[3]采用大豆素代替葛根素作为对照品,在250nm波长处测定愈风宁心片中总异黄酮的含量,并与以葛根素为对照品的测定方法作了比较,结果表明:大豆素标准品可以代替葛根素标准品用于总异黄酮的测定。

梁文法等[4,5]以氯仿-无水乙醇(7∶3)为展开剂,在硅胶G-CMC-Na薄层板上分离葛根素,以乙醇洗脱,在251nm波长处测定葛根及愈风宁心片中葛根素的含量。

周小初等[6]以氯仿-甲醇-水(7∶2.5:0.25)为展开剂,测定了冠心灵片中葛根素的含量,并对葛根药材中葛根素含量进行比较,结果表明野葛根与粉葛根中葛根素含量相差10~67倍。

王名洲等[7]选用正丁醇处理样品,采用薄层-紫外法对心通口服液中葛根素的含量进行测定,该方法简便、稳定、结果准确。标准曲线相关系数r=0.9996,平均回收率为99.57%,RSD为0.60%。

葛新等[8]采用薄层层析一阶导数光谱法对益心脑胶囊中葛根素含量进行测定,加样回收率为96.43%,RSD为1.25%。1.2 薄层层析-比色法 用薄层层析分离葛根素,利用葛根素分子结构中的酚羟基,能与磷钨酸-磷钼酸试剂产生颜色反应,在700nm波长处有最大吸收的特性进行比色测定。

詹贵成等[9]利用硅胶G薄层板,以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(27∶28∶40∶10)展开,葛根素为对照品,在700nm波长处测定了葛根芩连汤中葛根素的含量。

徐礼等[10]以氯仿-甲醇(8∶2)为展开剂,测定了葛根药材中葛根素的含量。

2 色谱法

2.1 薄层扫描法(TLCS)

多用于测定葛根及其制剂中葛根素的含量。具有取样量少,操作简便,分离效果好,结果准确的特点。

赵胜利等[11]以展开剂Ⅰ:氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)分离葛根素,以展开剂Ⅱ:氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(2∶2∶4∶1)分离黄豆甙元,用盐酸羟铵-硝酸铈铵为显色剂,选用440nm滤光片,扫描测定了愈风宁心片中两种成分的含量。

赵世萍等[12]以甲苯-甲醇-10%甲酸(7∶3∶0.2)和醋酸乙酯-甲醇-50%甲酸(8∶2∶0.2)为展开剂,在硅胶G薄层板上分离了大豆甙元、大豆甙、葛根素和大豆甙元-4’,7-二葡萄糖,采用双波长反射锯齿扫描法,在λs=250nm,λR=360nm,测定了葛根及愈风宁心片中四种成分含量。

闵庆旺等[13],选用硅胶GF254预制薄层板,醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂,芦丁为内标物进行单波长反射法锯齿扫描λs=275nm,测定愈风宁心片中葛根素的含量,线性范围为0.38~3.8μg。

傅先珏等[14]采用中性氧化铝柱处理样品以硅胶GF254薄层板为固定相,氯仿-甲醇-水(60∶40∶9)为展开剂,在饱和氨蒸气下展开,进行双波长反射法锯齿扫描λs=260nm、λR=360nm测定复方伤风胶囊中葛根素的含量。

李守拙等[15]选用硅胶GF254薄层板,以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶1∶0.5)及氯仿-甲醇(5∶1)两次展开,进行双波长反射法锯齿扫描λs=254nm、λR=333nm,测定了20批颈复康冲剂中葛根素的含量。

秦青[16]以95%乙醇处理样品,氯仿-甲醇-水(25∶16∶3)为展开剂,进行扫描测定λs=258nm,λR=360nm,测定玉泉冲剂中葛根素的含量,线性范围0.24~0.60μg。

郭建平等[17]采用高效硅胶板GF254,氯仿-甲醇-水(7∶2.5∶0.5)为展开剂,在255nm处紫外扫描测定葛根提取物及其制剂中葛根素的含量。

李正国等[18]采用超声振荡处理样品,氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(8.1∶9.4∶26∶4)为展开剂,进行双波长反射法线性扫描λs=305nm,λR=369nm。测定了止痢冲剂中葛根素的含量。

张蕾等[19]采用硅胶G薄层板,氯仿-甲醇-水(60∶40∶6.5)为展开剂,进行双波长反射法锯齿扫描λs=270nm、λR=370nm,对不同品种和产地的葛根中所含葛根素进行测定比较,结果野葛根中所含葛根素较粉葛根高约8~10倍。

苏健等[20]采用硅胶G0.3%CMC-Na薄层板,氯仿-甲醇-水(78∶35∶10)下层液为展开剂,进行单波长反射法锯齿扫描λs=265nm,测定镇脑宁胶囊中葛根素的含量。葛根素浓度在1.054~5.27μg范围内呈线性关系。2.2 高效液相色谱法(HPLC) 多用于葛根及其制剂中葛根素的测定。具有分析精度高,测定结果准确的特点,样品多采用不同浓度的甲醇、乙醇直接提取,也有经柱层析分离等方法。

张伟等[21]采用SpherisorbC18(5.0×200mm)色谱柱,甲醇-水(20∶80)为流动相,柱温40℃,检测波长250nm,以聚酰胺粉净化处理样品,测定鼻炎胶囊中葛根素含量,空白无干扰。

李汶等[22]采用ODS柱(250×4.6mm,5μm),甲醇-50%醋酸液为流动相,采用梯度淋洗方式于UV280nm波长处测定脑脉康胶囊中葛根素的含量,线性范围为0.156~2.94μg,平均加样回收率99.89%,RSD为0.55%。

张世勤等[23]选用ODSC18(4.6×250mm)色谱柱,流动相甲醇-水(25∶75),水为50mgEDTA与15.6gNaH2PO3溶至1000mL双蒸馏水的混合液。检测波长305nm,测定根痛平中葛根素的含量。

谭生健等[24]采用ShimpackCLC_ODS(150×6mm)分析柱,ODS保护柱,流动相甲醇-水(23∶77),柱温35℃,检测波长250nm,外标法计算含量,测定葛根芩连片中葛根素的含量。李光慧等[25]采用KYWG-C18为固定相,水-甲醇-N,N-二甲基甲酰胺(40∶10∶3)为流动相,UV检测波长250nm,对御感袋泡茶中葛根素进行含量测定。

李冠忠等[26]采用YWG10μm,C18(250×4.6mm)色谱柱,甲醇-水(25∶75)为流动相,检测波长250nm,外标法,测定心通口服液中葛根素含量,平均回收率为98.67%,RSD为1.23%。

仲英等[27]选用ResolveC18(8×100mm)径向加压色谱柱,以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,检测波长250nm,外标法,分别测定了2~12月份采集的葛根中葛根素的含量与其质量变化。结果葛根在不同季节葛根素的含量差异较大,6月份含量最高,约为3.5%,质量变化不大。

张小茜等[28,29]采用C18(4.6×250mm)色谱柱,甲醇-水(25∶75)为流动相,检测波长250nm,以30%乙醇为溶剂超声振荡处理样品,分别测定葛根及愈风宁心片中葛根素的含量。

章育中等[30]选用ZorbaxODS(4.0×250mm)层析柱,甲醇-水(32∶68)为流动相,流速0.4~1.4mL/min,橙皮甙为内标物,测定不同产地葛根及愈风宁心片中大豆甙元-4’,7-二葡萄糖甙、葛根素、4’-甲氧基葛根素、大豆甙、大豆甙元五种异黄酮的含量。

冯瑞芝等[31]采用ZY110 YWQ-C18(10μm,4.0×250mm)色谱柱,流动相(1)MeOH-H2O-CH2Cl2-1.7×10-3mol/L NH4Ac(100∶275∶2∶50);(2)MeOH-H2O-1.7×10-3mol/LNH4Ac(175:175∶50)用于分离黄豆甙元,检测波长250nm对6种葛属植物根中五种异黄酮的含量进行了测定,结果野葛质量最佳,其次是粉葛。