第三节 抗血清的鉴定和保存

一、抗血清的鉴定

动物血采集后,立即分离出血清,此抗血清在保存或应用前,必须作效价和特异性鉴定。

(一)双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性

按双向免疫扩散技术打两排孔,上排放抗原粗提物(如抗原来自动物血清则放相应的混合血清)和纯化抗原,下排加抗血清,进行双扩散18~24h后,仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若与粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线,且两者互相融合,则证明该动物已产生单价特异性抗体;不出现沉淀线,表明示免疫成功。若与纯化抗原出现一条,而与粗抗原出现多条线,且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接,也是成功的免疫,待取血后将杂抗体吸收去除,可以成为单价特异性抗体。

(二)双向免疫扩散法则定抗血清效价

测定抗血清效价有两种稀释方法:一是稀释抗血清,如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释,分别与一个浓度的纯抗原反应;另一是稀释抗原,即把抗原作对倍稀释或按浓度(如mg/ml)进行稀释,分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验(称为棋盘滴定),见表10-1。

表10-1抗血清效价测定

抗原 抗血清
不稀释 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128
不稀释 +++ +++ +++ ++ ++
1/2 +++ +++ +++ ++ ++
1/4 +++ +++ +++ ++ ++
1/8 +++ ++ ++ ++
1/16 ++ ++ ++
1/32
1/64

表中+~+++代表出现沉淀线的浓度,如1:8抗体出现中等浓度沉淀线,与1:16、1:32则出现较弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1:32,最佳抗原浓度为1:16。效价在1:8以上即可采用于一般试验。

(三)其他鉴定方法

有时,因抗原特殊,沉淀线不易出现,特别是制备的抗血清将用于某种试验时,则考虑用其它方法(如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等)测定其效价。

二、抗血清的保存

抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存,将抗血清清除菌后,液体状态保存于普通冰箱,可以存放3个月到半年,效价高时,一年之内不会影响使用。保存时要加入0.1%~0.2%NaN3以防腐。如若加入半量的甘油则保存期可延长。第二种方法是低温保存,放在-20~-40,一般保存5年效价不会有明显下降,但应防止反复冻融,反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装,以备取出后在短期内用完。第三种方法是冰冻干燥,最后制品内水分不应高于0.2%,封装后可以长期保存,一般在冰箱中5~10年内效价不会明显降低。