该法是以1982年Muhlpfordt法为基础，1985年Slot与Geuze对该法进行了改良，特点是通过改变鞣酸的用量制备出多种颗粒直径的胶体金，而且颗粒的直径均匀一致，很适合于双标及多标研究。制备3nm、5nm、10nm、15nm的胶体金颗粒见表5-3。
表5-3 鞣酸—柠檬酸三钠还原法
| A 液 | B 液 | |||||
| 直径（nm） | 1%柠檬酸钠（ml） | 0.1mol/L K2CO3ml | 1%鞣酸（ml） | H2O（ml） | 1%HAuCl4（ml） | H2O（ml） |
| 3.3 | 4 | 0.2 | 4 | 11.8 | 1 | 79 |
| 5 | 4 | 0.2 | 0.7 | 15.1 | 1 | 79 |
| 10 | 4 | 0.025 | 0.1 | 15.875 | 1 | 79 |
| 15 | 4 | 0.0025 | 0.01 | 15.987 | 1 | 79 |
操作步骤：
（1）根据所需要的胶体金颗粒分别配制A液和B液。
（2）将配制好的A、B两液在水浴内加热到60℃，并通过控温装置使温度保持稳定。
（3）在电磁搅拌器上搅拌A液迅速加入B液，继续加热直至胶体金变成葡萄酒色，时间大约7～10min。在A、B两液混合后可见溶液立即变成蓝色，大约1～3min就变成红色。
用鞣酸—柠檬酸三钠还原法，柠檬酸三钠主要为还原剂，而鞣酸则有双重作用，一是还原作用，二是保护作用，控制“晶核”的形成过程，也就是说鞣酸的用量多少决定胶体金颗粒的大小形成，因此改变鞣酸的用量就可以改变胶体金的颗粒大小，达到制备不同直径颗粒的胶体金之目的。
