1．HRP标记凝集素法适用于小量的凝集素标记（Ponder 1983）。
（1）HRP的活化
①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中（1.25g/50ml）。
②加50μl含1%氟二硝基苯的无水乙醇溶液，室温轻度搅拌1h。
③加1ml含0.06mol/L的过碘酸钠的蒸馏水（0.62g/50ml），室温下轻度搅拌30min。
④在室温下加两滴0.16mol/L乙二醇，轻搅1h。
⑤用Sephadex G—25装成小柱，用0.3mol/L的重碳酸钠溶液，使含HRP的混合液过柱。
（2）结合
①正常条件下，可用凝集素及过氧化物酶各半量，但其比例可根据需要调整，以10mg凝集素溶解在25ml的重碳酸盐缓冲液里，加到“活化”的HRP中去 ，这样得出的凝集素浓度大约是0.3mg/ml，可加进0.1mol/L相应的特异的糖，以保护凝集素结合时的结合部位。糖在下步透析或层析时去掉。
②在室温下轻搅拌，结合3h。
③加入1mg硼氢化钠，室温下作用1h以稳定结合物活性。
④用1N HCl调整pH至6.4，留置室温下过夜。
（3）纯化
①用适当的凝胶层析柱如SephadexG—200、Saphacryl—300层析法将游离的凝集素、游离的过氧化物酶和高分子量的成分从结合物分离出去，包括抑制性的糖也在此时分离出去。
②提纯后的结合物在280nm和403nm波长处测量其吸光率。用1%BSA先通过0.22μm的微孔过滤器，以确定被结合的凝集素是否被吸附在滤器中，然后上述结合物经过该微孔滤过器过滤到一个无菌瓶中。
③加入叠氮钠，浓度1：1000，保存于4℃C备用。
2．抗凝集素抗体的制备抗凝集素抗体的制备法与一般免疫血清制备大致相同（见第二章 ）。所不同的是：①凝集素具有较强的毒性，易使被免疫动物发病或甚至死亡。解决的方法是经处理使凝集素变性，从而减低其毒性，但同时要保证其抗原性不受或少受破坏。②要设法阻断凝集素的糖结合部位，以减少对这些部位的抗体的产生，解决的办法是预先以相应的糖阻断这些结合部位。Leathem 和Atkin（1982）设计了一个办法，他们首先应用琼脂糖（Sepharose）珠，珠上有一系列共价糖的附着，这些糖可阻断凝集素结合部位，这种糖珠有商品供应（Sigma LtD），每1ml糖珠能结合大约12mg凝集素。其次用加入福尔马林和加热的方法使凝集素变性，毒性减低而不影响抗原性。具体操作如下：
①1ml琼脂糖—半乳糖珠与1mg花生凝集素相结合，室温1h。
②加入10ml 10%福尔马林，在水浴中加热到60℃，1h。
③用盐水离心洗珠，将珠分成以10μl为单位的若干小份，保存在-20℃。
④皮下多处注射两只家兔背部，每次注射100μl，每隔三周注射一次。取血40～50ml，保存在-20℃备用。
