免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。
1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer, PB）
试剂： NaH2PO4·2H2O
Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。
（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2o 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2o 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（PhosphateBuffered Saline, PBS）
试剂：0.2mol/L PB 50ml
NaCl 8.5～9g(约0.15mol/L)
重蒸水 至1000ml
配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。
3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液
试剂： NaH2PO4·H2O3.31g
Na2HPO4·7H2O 33.77g
重蒸水 至1000ml
配制方法：同前
该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g
1N HCl 约420ml
重蒸水 至1000ml
配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris,加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。
5．Tris缓冲生理盐水（TrisBuffered,Saline,TBS）
试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液 100ml
NaCl 3.5～9g(0.15mol/L)
重蒸水至1000ml
配制：先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。
TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。
6．Tris-TBS(PBS)
试剂：Triton X-100 10ml(1%)或3ml(0.3%)
0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)
NaCl8.5～9g
重蒸水 至1000ml
配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。
该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。
7．0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液
试剂：0.2mol/L二甲胂酸钠500ml
0.1N HCl28ml
蒸馏水 至1000ml
配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g,加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ,配成0.1N，最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。
8．几种常用的不同pH值缓冲液的配制表
（1）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）
| pH | 0.2mol/L NaH2PO4(ml) | 0.2mol/L Na2HPO4(ml) |
| 5.7 | 93.5 | 6.5 |
| 5.8 | 92.0 | 8.0 |
| 5.9 | 90.0 | 10.0 |
| 6.0 | 87.7 | 12.3 |
| 6.1 | 85.0 | 15.0 |
| 6.2 | 81.5 | 18.5 |
| 6.3 | 77.5 | 22.5 |
| 6.4 | 73.5 | 26.5 |
| 6.5 | 68.5 | 31.5 |
| 6.6 | 62.5 | 37.5 |
| 6.7 | 56.5 | 43.5 |
| 6.8 | 51.0 | 49.0 |
| 6.9 | 45.0 | 55.0 |
| 7.0 | 39.0 | 61.0 |
| 7.1 | 33.0 | 67.0 |
| 7.2 | 28.0 | 72.0 |
| 7.3 | 23.0 | 67.0 |
| 7.4 | 19.0 | 81.0 |
| 7.5 | 16.0 | 84.0 |
| 7.6 | 13.0 | 87.0 |
| 7.7 | 10.5 | 89.5 |
| 7.8 | 8.5 | 91.5 |
| 7.9 | 7.0 | 93.0 |
| 8.0 | 5.3 | 94.7 |
(2)0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH7.19～9.10）
| pH | 0.2mol/L Tris(ml) | 0.2mol/L HCl(ml) | H2O |
| 7.19 | 10.0 | 18.0 | 12.0 |
| 7.36 | 10.0 | 17.0 | 13.0 |
| 7.54 | 10.0 | 16.0 | 14.0 |
| 7.66 | 10.0 | 14.0 | 15.0 |
| 7.77 | 10.0 | 14.0 | 16.0 |
| 7.87 | 10.0 | 13.0 | 17.0 |
| 7.96 | 10.0 | 12.0 | 18.0 |
| 8.05 | 10.0 | 11.0 | 19.0 |
| 8.14 | 10.0 | 10.0 | 20.0 |
| 8.23 | 10.0 | 9.0 | 21.0 |
| 8.32 | 10.0 | 8.0 | 22.0 |
| 8.41 | 10.0 | 7.0 | 23.0 |
| 8.51 | 10.0 | 6.0 | 24.0 |
| 8.62 | 10.0 | 5.0 | 25.0 |
| 8.74 | 10.0 | 4.0 | 26.0 |
| 8.92 | 10.0 | 3.0 | 27.0 |
| 9.10 | 10.0 | 2.0 | 28.0 |
(3)0.2mol/L醋酸盐缓冲液（pH3.6～5.6）
| pH | 0.2mol/L醋酸（ml） | 0.2mol/L醋酸钠（ml） |
| 3.6 | 46.3 | 3.7 |
| 3.8 | 44.0 | 6.0 |
| 4.0 | 41.0 | 9.0 |
| 4.2 | 36.8 | 13.2 |
| 4.4 | 30.5 | 19.5 |
| 4.6 | 25.5 | 24.5 |
| 4.8 | 20.0 | 30.0 |
| 5.0 | 14.8 | 35.2 |
| 5.2 | 10.5 | 39.5 |
| 5.4 | 8.8 | 41.2 |
| 5.6 | 4.8 | 45.2 |
(4)0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH5.0～7.4）
| pH | 0.2mol/L二甲胂酸钠（ml） | 0.2N HCl(ml) | 蒸馏水 |
| 5.0 | 25 | 23.5 | 51.5 |
| 5.2 | 25 | 22.5 | 52.5 |
| 5.4 | 25 | 21.5 | 53.5 |
| 5.6 | 25 | 19.6 | 55.5 |
| 5.8 | 25 | 17.4 | 57.5 |
| 6.0 | 25 | 14.8 | 60.3 |
| 6.2 | 25 | 11.9 | 63.1 |
| 6.4 | 25 | 9.2 | 65.8 |
| 6.6 | 25 | 6.7 | 68.3 |
| 6.8 | 25 | 4.7 | 70.3 |
| 7.0 | 25 | 3.2 | 71.8 |
| 7.2 | 25 | 2.1 | 72.9 |
| 7.4 | 25 | 1.4 | 73.6 |
注：HCI可由NCO3代替，配制成二甲胂酸钠-HNO3缓冲液。
（5）0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）
| pH | 0.2mol/L Na2CO3(ml) | 0.2mol/L NaHCO3(ml) |
| 9.2 | 4.0 | 46.0 |
| 9.3 | 7.5 | 42.5 |
| 9.4 | 9.5 | 40.5 |
| 9.5 | 13.0 | 37.0 |
| 9.6 | 16.0 | 34.0 |
| 9.7 | 19.5 | 30.5 |
| 9.8 | 22.0 | 28.0 |
| 9.9 | 25.0 | 25.0 |
| 10.0 | 27.5 | 22.5 |
| 10.1 | 30.0 | 20.0 |
| 10.2 | 33.0 | 17.0 |
| 10.3 | 35.5 | 14.5 |
| 10.4 | 38.5 | 11.5 |
| 10.5 | 40.5 | 9.5 |
| 10.6 | 42.5 | 7.5 |
| 10.7 | 45.0 | 5.0 |
