第三节 免疫金银染色

免疫金银染色(immunogoldsilverstaining,IGSS)是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术,由Holgate在1983年首先建立成功。

一、原理

金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒,在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层,因而增强了金免疫技术的敏感性(图19-3)。

免疫金银染色原理示意图

图19-3 免疫金银染色原理示意图

二、方法

IGSS的主要试剂为银染液。以往一般用硝酸银染液,但其对光的稳定性较差;改用乙酸银溶液后稳定性加强,配方如下:

A液:0.22%乙酸银溶液(乙酸银110mg溶于去离子水50ml中)。

B液:50%阿拉伯树胶溶液(阿拉伯树胶50g溶于去离子水100ml中,每天振摇3次,5天后过滤使用)。

C液:1%对苯二酚溶液(对苯二酚500mg溶于0.55mol/LpH3.8的柠檬酸盐缓冲液50ml中)。

D液:在C液中加入B液10~40ml。

使用前将A液和D液等量混合,即为银染液。

IGSS多用于组织化学检测。对于以膜为载体的免疫学试验,金染色后的银加强可按下法进行:将膜用0.05mol/LpH8.2TBS浸洗3次,每次3min,用去离子水冲洗一次,浸入0.05mol/LpH3.8柠檬酸缓冲液平衡5min,浸入银染液中,37℃25min。将膜取出,用去离子水冲洗,放入定影液1min,去离子水冲洗,空气干燥。

三、应用

金免疫技术的敏感度低于其它标记免疫技术,经银加强染色后敏感度可与荧光免疫技术和酶免疫技术相当。因此近年来发展了不少IGSS方法以替代荧光免疫技术,可以在普通显微镜下进行检测。

在以膜为载体的免疫技术(如免疫印迹法)中,也有应用IGSS以替代酶免疫法。也有用金标记抗体代替酶标记抗体进行类似ELISA的测定,最后进行银加强,其敏感度与ELISA相仿。