一、IL-1的检测

IL-1有两种分子形式,即IL-1α和IL-2β,它们的生物学活性基本相同,均可采用生物学检测方法进行检测,若要区分IL-1α和IL-2β需用免疫学检测法。

(一)细胞增殖法

1.淋巴细胞增殖法IL-1具有淋巴细胞活化因子的活性,可以协同促有丝分裂原刺激T细胞或胸腺细胞发生有丝分裂,同时IL-1可以刺激T细胞产生IL-2或其它T细胞生长因子,并使之表达相应的受体。因此用细胞增殖法检测IL-1可有直接增殖法和间接增殖法两种。

(1)直接增殖法:IL-1在促有丝分裂原存在的情况下,能够促使胸腺淋巴细胞和某些体外建株的T细胞克隆生长,因此测定这些细胞的增殖情况即可反映IL-1的活性。小鼠胸腺细胞测定法操作简单,比较常用,缺点是缺少特异性,因为IL-2亦可协同促有丝分裂原刺激胸腺细胞增殖。D10G4.1(一种小鼠TH细胞克隆)测定法较胸腺细胞测定法的敏感性高,且D10G4.1对IL-2不敏感,因此特异性增强,缺点是需要长期饲养细胞株,该实验以3H-TdR掺入法或MTT法检测细胞增殖情况。通常IL-1浓度越高,细胞转化能力越强,IL-1浓度低于0.05ng/ml时,细胞转化能力接近促有丝分裂原单独刺激的程度。

(2)间接增殖法:某些品系小鼠的T细胞系只有在IL-1存在的条件下才能产生IL-2,并且IL-2的产生量与IL-1的浓度成直线关系。因此可以利用IL-2依赖细胞株(如CTLL2)测定IL-2,藉以间接测定IL-1的含量。

2.成纤维细胞增殖法IL-1能刺激成纤维细胞的增殖,故可利用来源于新生儿包皮或传代的人皮肤成纤维细胞(如CRL1445)测定IL-1。国内常用小鼠成纤维细胞瘤L929细胞株。

检测原则是将生长成单层的L929细胞用胰酶消化后,配成适当浓度的细胞悬液,继将不同稀释度的待测样本与L929细胞悬液分加入96孔培养液中。一式三份,并设置阴性对照,放入37℃、5%CO2的温箱中温育72h,在第16h时加入适量3H-TdR,继续温育,结束后离心弃去培养上清,加入适量胰酶消化数分钟后,收集细胞测定cpm值或吸光度值。

(二)其他方法

1.骨和较骨组织测定法利用IL-1可诱导胶原酶释放,破坏软骨组织的特性,用分光光度计测定软骨硫酸盐释放量,即可间接椎知IL-1量。又如IL-1能影响骨质吸收,应用放射性45Ca通过小鼠头顶骨系统吸收可测定IL-1活性,为骨质吸收释放法。

2.PGE2测定法IL-1作用于下丘脑,诱导脑细胞合成前列腺素E2(PGE2),发挥致热原作用;还能诱导原代培养或建株传代的成纤维细胞产生PGE2,故可用放免疫技术测定PGE2藉以间接测定IL-1。

3.放射免疫测定法本法利用受检IL-1样品与碘标记IL-1竞争性结合Sepharose4B中抗IL-1抗体结合位点的原理而设计。该法敏感性较高,且可排除样品中其它干扰因素的影响,其特点是可以区分IL-1α和IL-1β。

4.体内测定法IL-1在体内可诱导发热、引起急性期蛋白合成及影响血中铁和锌水平。实验室多利用IL-1的致热原作用加以检测。在给动物静脉注射IL-1前后,以体温的升高幅度表示IL-1的活性,或定期测定血清中某些急性期蛋白的含量,如血清淀粉样蛋白A,血清淀粉样蛋白P等。

总之,由于IL-1的生物学活性比较广泛,其检测方法亦多种多样,但每种方法均有其缺点,往往需要结合使用。T细胞增殖法简便、易行且敏感,但样品中若混有IL-2,则可协同促有丝分裂原刺激T细胞增殖,从而干扰IL-1的测定。血清中的TNF同样可以刺激成纤维细胞的增殖,也可用成纤维细胞测定法,但特异性较差。放免法可排除其它因子的干扰,但此法仅测得IL-1的抗原性,不能完全代表其生物学活性。