一、亮度法
1．原理
血清中游离脂肪酸经抽提到高密度铜试剂中，形成铜皂在上层溶剂中，再用二苯卡巴肼与铜显色，进行定量。
2．试剂组成
| 代号 | 种类 | 浓度 | 组成 | 贮存2～8℃ | 有效期 |
| R-1 | 抽提剂 | 氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1（V/V） | |||
| R-2 | 缓冲液 | 33mmol/L | KH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml调pH至6.4 | ||
| R-3 | 铜贮液 | 500mmol/L | Cu（NO3）2·3H2o 12.07g加H2O→100ml | ||
| R-4 | 三乙醇胺 | 1.0mol/L | 三乙醇胺10ml，加水→100ml | ||
| R-5 | NaOH液 | 1mol/L | |||
| R-6 | 铜试剂 | R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml +H2O→100ml调pH至8.1 |
|||
| R-7 | 二苯卡 巴肼液 |
二苯卡巴肼（乙醇）液（4g/L）10ml+R-4 0.1ml | 临用前配制 | ||
| R-8 | 软脂酸标准贮存液 | 2mmol/L | 软脂酸51.2mg溶于100ml R-1液 | 冷藏 | |
| R-9 | R-8的应用液 | 500μmol/L | 用R-1液稀释 | 冷藏 |
3．操作
按图15-7操作。
4．计算
血清游离脂肪酸（μmol/L）=ESA/EST×500
二、酶法
1．原理
血清中游离脂肪酸或非酯化脂肪酸（NEFA），经酶试剂作用生成紫色化合物，其颜色深浅与NEFA含量成正比。
2．试剂组成
| 代号 | 种类 | 组成 | 浓度贮存 | 贮存 |
| R1 | 缓冲液 | 磷酸缓冲液 MgCl2液 去垢剂 |
0.04mmol/LpH6.9 3mol/L |
|
| R2 | 酶/辅酶 | 乙酰CoA合成酶 抗坏血酸氧化酶 CoA ATP 4-AAP 溶于10ml R1液中 |
≥0.3U/ml ≥1.5U/ml 0.9mmol/L 5.0mmol/L 1.5mmol/L |
冷藏5日 |
| R3 | 酶稀释液 | 苯氧乙醇 去垢剂 |
0.3%(V/V) | |
| R4 | 马来酰亚胺 该试剂与R3等体积混合 |
10.6mmol/L | ||
| R5 | 酶试剂 | 乙酰CoA氧化酶 过氧化物酶 TOOS 混合上述试剂，再等体积R4试剂混合 |
≥10U/ml 7.5U/ml 0.2mmol/L |
冷藏5日 |
| R6 | 标准液 | 1mmol/L | 冷藏 |
*应用带玻塞离心管
3．操作
按图15-8操作。
4．计算
图15-7 血清非酯化脂肪酸测定(光度法)操作图
图15-8 血清非脂化脂肪酸测定（酶法）操作图
（胡汉宁 储建中）
