三、以载脂蛋白组成作脂蛋白颗粒分类

传统的脂蛋白分类是根据其密度和电泳行为分类,但是每一类脂蛋白不仅密度、大小、脂蛋白比是不均一的,载脂蛋白的组成也不同,载脂蛋白是唯一具有化学和免疫学独立特性的脂蛋白的组成部分,所以要进行准确的脂质运转研究,用传统的以物理性质分类的方法是有缺陷的。

Alaupovic提出将载脂蛋白组成作为鉴定脂蛋白颗粒的标志及脂蛋白分类的基础。每个脂蛋白颗粒只含一种载脂蛋白称为单脂蛋白,如LDL中多数脂蛋白只含ApoB100,称为脂蛋白B(LpB);若含有二种或二种以上不可分离的载脂蛋白叫复脂蛋白,如LDL中的脂蛋白颗粒含有ApoB、CI、CⅡ和CⅢ,称为LpB:CⅠ:CⅡ:CⅢ(LpB:C)。单脂蛋白和复脂蛋白是大颗粒脂蛋白体系中基本的化学实体,可以有不同的密度、大小、脂/蛋白比,但载脂蛋白的性质不变,具有特定的功能和代谢特征。

按Alaupovic提出的分类方法,ApoA和ApoB组成不同两类主要的脂蛋白颗粒,前者主要存在于HDL,而后者主要存在于VLDL和LDL中,每种都可分为单脂蛋白和复脂蛋白。含有ApoA的脂蛋白颗粒主要有LpAⅠ和LpAⅠ:AⅡ,含ApoB的脂蛋白颗粒有LpB,LpB:E,LpB:C,LpB:C:E和LpAⅡ:B:C:D:E等。

分离脂蛋白颗粒的方法主要是免疫亲和层析。

(1)含ApoA脂蛋白颗粒的分离:从ApoAⅡ抗血清提取免疫球蛋白(IgG),用抗ApoAⅡ-IgG与吸附剂交联制备免疫吸附柱,用pH7.0磷酸盐缓冲液平衡,将新鲜血清或HDL过柱,柱上保留的部分为LpAⅡ和LpAⅠ:AⅡ,滤出未保留的部分主要为Lpa Ⅰ,用3mol/L硫氰酸钠洗脱LpAⅡ和LpAⅠ:AⅡ,透析。分别将保留的部分洗脱的部分,通过抗ApoAⅠ-IgG交联的吸附柱,分离LpAⅠ、LpAⅠ:AⅡ、LpAⅡ和其他脂蛋白颗粒。用免疫扩散及免疫电泳方法鉴定LpAⅠ和LpAⅠ:AⅡ的载脂蛋白的组成。血浆中大约35~45%的ApoAⅠ存在于LpAⅠ,而55~60%存在于LpAⅠ:AⅡ,LpAⅠ占总的含ApoA脂蛋白的20~28%,LpAⅠ:AⅡ占72~80%,与LpAⅠ:AⅡ相比,LpAⅠ具有较高的胆固醇和较低的蛋白质组成,LpAⅠ和LpAⅠ:AⅡ的平均颗粒大小分别为379000和269000。

(2)含ApoB脂蛋白颗粒的分离:含ApoB脂蛋白颗粒可采用免疫亲和层析法,将VLDL和LDL中的脂蛋白颗粒分为富含胆固醇酯的LpB、LpB:E和富含甘油三酯(TG)的LpB:C,LpB:C:E和LpAⅡ:B:C:D:E等,其中LpB是主要的单脂蛋白,主要存在于LDL2中LpB:C和LpB:C:E是主要的复脂蛋白,随着密度的增加,胆固醇和胆固醇脂的含量升高而TG含量降低。

尽管对含ApoA和ApoB脂蛋白颗粒的功能和代谢研究还处在早期发展阶段,但已有许多证据表明,以载脂蛋白组成分类的脂蛋白颗粒具有功能一致性和代谢均一性,并有特定的致动脉粥样硬化(AS)作用或抗AS功效。

据报道,LpAⅠ和LpAⅠ:AⅡ具不同的功能和代谢特征。卵磷脂酯胆固醇酰基转移酶(LCAT)和胆固醇酯转运蛋白(CETP)主要存在于Lpa I而不存在LpAⅠ:AⅡ中。一项对有早发心肌梗塞家族史的青少年的研究表明,家族史与LpAⅠ有明显负相关,而与LpAⅠ:AⅡ无关,并认为,HDL抗动脉粥样硬化的功效在LpAⅠ,而不是LpAⅠ:AⅡ。含ApoB的脂蛋白颗粒,若ApoE/ApoC升高,则分解速度快。实验证明,ApoE含量升高,加快鼠灌注肝脏对富含TG脂蛋白的吸收,而ApoC则降低这一吸收;另外富含TG脂蛋白的降解速度不仅依赖于脂蛋白脂酶(LPL)的含量和活性,还与脂蛋白颗粒中LPL底物的反应性有关,如LpAⅡ:B:C:D:E的脂含量及脂蛋白质比与LpB:C和LpB:C:E很相似,而与LPL反应的速率常数比后两者低得多,水解速度慢,表明载脂蛋白组成对脂蛋白颗粒的分解代谢有重要影响。含ApoB脂蛋白颗粒也有不同的致AS作用,例如家族性高胆固醇血症(FH)病人的特点是LpB和LpB:E水平升高,LpAⅠ和LpAⅠ:AⅡ无明显变化;而高TG血症则伴随着LpB:C、LpB:c:E和LpAⅡ:B:C:D:E的升高及LpAⅠ和/或LpAⅠ:AⅡ的降低。富含TG的LpB脂蛋白颗粒也具有重要的致AS作用。如Ⅱa型病人LpB水平高。