五、脂蛋白x的电泳分析

1.原理

血清脂蛋白x的组成中磷脂占66%,蛋白质仅占6%,在电场中因电荷少,选择电渗大小合适的琼脂为电泳支持物,则LpX向阴极移动,而其他蛋白质向阴极移动,从而达到分离的目的。用免疫沉淀法或聚阴离子沉淀法使其在琼脂板上沉淀,对于LpX阳性的血清可以在加样孔的阴极端见到白色沉淀带。

2、试剂

巴比妥缓冲液500mmol/L:pH8.6,离子强度0.05。

1%琼脂用上述巴比妥缓冲液加热配制。

沉淀剂;每升中含MgCl20.1mol,肝素2.5g及MaCl9g。

3.仪器:电泳仪。

4.操作:

(1)制板 1%琼脂糖加热未冷却前于一洁净载玻片上均匀铺开。凝固后在一端2cm~3cm处打孔(直径约2.5mm)。

(2)电泳 将血清20μl加于小孔内(勿使外溢和有气泡)。按琼脂糖脂蛋白电泳操作、搭桥、通电1mA、40min。

(3)浆琼脂玻片浸在沉淀剂中30min后观察结果(如Lp-x阳性,数min内即出现沉淀线),Lp-x浓度到3.3mg/dl上即可出现阳性反应。

正常值:正常人血清无Lp-x带。

(储建中 吴翠华)