2 结果

2.1 Hp的基本生物学性状

2.1.1 光镜下形态结构 Hp为“S”形、“U”形或弧形杆菌。菌体宽0.3~0.5μm,长1.5~5.0μm。大多大小均匀,形态典型,革兰染色阴性。Hp较CJ/CC稍粗,两端钝圆。在陈旧培养物中,Hp常变成圆球体,在革兰染色下呈现大小不一、染色深浅不均,周围界较模糊的特征。在胃粘膜活检标本直接涂片中,多数存在于着色较浅的粘液带中,常呈鱼贯状排列,在Hp密集处,甚少杂菌混杂,在着色的组织液背镜下,Hp菌全周围常呈现有微荚膜样结构。在病理组织切片中可见,Hp多数存在胃粘膜上皮细胞表面,特别是在胃小凹。在病理切片中尚可见到在胃粘膜表面有Hp存在的附近部位常有大量中性粒细胞、浆细胞等炎症细胞的浸润。在胃的肠腺化生区域很难找到Hp,但是在十二指肠的胃化生区域却能找到Hp。

2.1.2 菌落特征及细菌动力 在微需氧条件下,经37°C72h培养,Hp形成较小菌落,直径<1mm,呈灰白或灰色,边缘整齐,隆起的圆形菌落。打开平皿有一股特异的气味。新鲜的菌落制成湿片在暗视野下可见Hp呈螺旋状迅速向前的运动。亦可见翻滚运动。

2.1.3 生化反应特征 Hp的生化反应特征见表2。Hp均有氧化酶、触酶、尿素酶、DNA酶、碱性磷酸酶和亮氨酰酞酶,而马尿酸盐试验均阴性,CJ和CC仅有氧化酶和触酶,而CJ-S131能分解马尿酸盐。

2.1.4 Hp对抗生素的敏感性 25株Hp对13种抗菌药物的药敏性见表3。

表2 Hp、CJ和CC生化反应

试验 Hp-88065 Hp-88073 Hp-88082 CP-88109 Hp-88152 CJ-S131 CJ-3276 CC-3278
氧化酶 + + + + + + + +
触酶 + + + + + + + +
尿素酶 + + + + +
DNA酶 + + + + +
碱性磷酸酶 + + + + +
亮氨酰氨酞酶 + + + + +
马尿酸盐 +

表3 25株Hp对13种抗菌药物的药敏结果

抗菌药物 MIC(μg/ml)
MIC50 MIC90
洁霉素 0.78 12.5
红霉素 <0.05 0.39
TMP >100 >100
先锋霉素V 0.2 25
链霉素 <0.05 0.39
四环素 <05 0.2
庆大霉素 0.2 0.78
青霉素G <0.05 0.1
万古霉素 6.25 >100
多粘菌素B 6.25 50
次硝酸铋 3.12 25
痢特灵 <0.05 0.2
灭滴灵 1.56 >100

从表中可知所有被检的Hp菌株对红霉素、链霉素、四环素、庆大霉素、青霉素G及痢特灵敏感,其中特别是四环素、青霉素G和痢特灵的敏感性尤甚,MIC90分别是0.2,0.1及0.2。MIC50均< 0.05。Hp对TMP、多粘菌素B、万古菌素及灭滴灵耐药,大部分菌株的MIC均>100。

2.1.5 菌种保存 15株Hp菌株,经-70°C冰箱保存一年后复苏,14株存活,对存活的14株作直接涂片革兰染色,油镜检查,其中的13株形态不变,1株成圆球体。我们又对这13株进行了氧化酶、触酶、尿素酶、DNA酶、碱性磷酸酶试验,13株Hp阳性,这与保存前相同。

2.2 Hp的超微结构

从不同病人胃粘膜上分离得Hp的形态结构基本一致,呈”S”形弯曲、弧形或稍直,偶见分枝状。一般表面较光滑,一端或二端(多数为一端)具有2~6条带鞘鞭毛,长度稍长于菌体。带鞘的鞭毛直径在30mm左右。每一鞭毛基部与菌体细胞膜上直径约50mm的圆球状结构相连。菌体末端鞭毛基础结构内侧,有一宽达200mm~400mm的电子密度明显降低区域,其基底部无明显的细胞膜结构界限。在Hp负染标本中,部分菌株在菌体周围可见大小均一、排列整齐的上百个“指”状突起,似直接为外膜的组成部分,与菌体内部结构无明显直接关系。在参考菌株中,CJ与CC末端呈圆锥体样,稍尖,顶端明显地呈吸盘样结构。CJ与CC均有单根无鞘端鞭毛从顶端的吸盘样凹陷的中心伸出。鞭毛根部均未见电子密度明显降低区域。

在胃粘膜活检标本的超薄片中可见:一般情况下,胃粘膜上皮与粘液层间不存在细菌。若出现细菌,常为大小、形态较统一的、都呈弯曲样特征的菌群。多聚居在胃小凹中或上皮细胞与上皮细胞连接处,亦常常镶嵌在微绒毛之间。偶见Hp在局部的胃粘膜上皮上定位似有明显的方向性。Hp与粘膜上皮的粘附方式有三种:Hp通过鞭毛顶端直接插入或粘附在胃粘膜上皮细胞表面;Hp菌体怀胃上皮细胞间保持一定的间距,借无数的细丝状菌毛样网状结构使两者互相粘附;Hp菌体的部分细胞壁与胃上皮细胞的细胞膜直接相贴粘附,二者间几无间距。最多见的是第二形式,有时同一细菌可同时出现两种或以上粘附形式。Hp粘附聚居外的上皮细胞除微绒毛明显减少或消失外,多数情况下很少发现有明显的细胞病理学变化。胃粘膜上皮表面有Hp粘附的邻近区域,往往有炎性细胞的浸润和渗出。胃粘膜上皮细胞中尚可偶见对Hp的吞噬现象。

2.3 Hp的DNA+Cmol%和菌体脂肪酸组成

2.3.1 Hp的DNAG+C MOL%含量测得的Hp、CJ/CC DNA G+Cmol%含量见表4

表4 Hp CJ/CC DNA G+C mol%含量

菌种 Hp-88065 Hp-88073 Hp-88082 Hp88109 Hp88152 CJ-S131 CJ-3276 CC-3278
DNA 38.3 35.7 36.8 37.5 37.3 36.3 37.9 36.1
G+C mol%

2.3.2 Hp ,CJ/CC菌体脂肪酸的组成 Hp 的脂肪酸组成主要是十九碳环丙烷酸(19:0cyc)、十八碳酸(18:0)、十八碳烯酸(18:1)和十四碳酸(14:0),CJ/CC的脂肪酸组成主要是十六碳酸(16:0)、十六碳烯酸(16:1)和十八碳烯酸(18:1,表5)。

表5 Hp,CJ/CC菌体脂肪酸组成

菌 种 脂肪酸组成(占总%)
14:0 15:0 16:0 16:1 17:0 18:0 18:1 18:2 19:0cyc 19:0
Hp-88065 18.72 1.62 3.25 0.50 0.48 16.22 21.03 2.24 24.20 3.34
Hp-88073 4.90 - 2.17 - - 26.24 39.7 - 7.33 -
Hp-88082 7.29 - - - - 25.47 22.74 - 39.24 -
Hp-88109 3.68 0.87 7.02 0.63 - 21.48 31.99 2.11 27.31 -
Hp-8152 1.23 0.70 2.57 - - 29.27 23.30 3.02 39.27 0.64
CJ-3276 1.06 - 37.42 17.62 - - 38.89 3.83 - -
CC-3278 6.85 - 38.82 19.39 - - 30.23 2.29 - -

2.4 Hp菌体蛋白电泳与CJ分型血清间的交叉反应

2.4.1 CP菌体蛋白SDS-PAGE Hp的主要条带Mr约为25100,28200,44700,62000,70800,81900,12600七条。CJ/CC条带相似,其主要条带Mr约为63000,89100和100000。

2.4.2 CP与CJ抗原交叉反应可见除CJ-22502免疫获得的Penner45型血清与绝大部分Hp菌株(28株中的19株)及PennerV组多价血清与Hp-85607有较强的交叉反应外,其余几乎无免疫学上的交叉(表6)。Hp-85067与V组多价血清的因子血清的反应结果见表7。

表7 Hp-85067与V组因子血清间的抗原抗体交叉反

CP菌株 CJ免疫菌株号 78 77 76 75 68 65 22023
Penner分型血清 37 36 35 34 26 23 4
CP85067 1:640 - - +++ +++ +++ - +++
CP85067 1:1280 - - +++ +++ +++ - +++